單細胞測序技術是指在單細胞水平上對核酸分子進行測序的技術。近年來,單細胞測序技術異軍突起,成為分子生物學研究的熱點,在醫(yī)學、生物化學、生命科學等領域取得了卓越的成果,也成為了單細胞生態(tài)學的重要組成部分。
目前10X Genomics平臺是市場上最為常見的單細胞測序平臺,基于10X Genomics平臺的高通量單細胞測序技術是利用液滴法的原理,使用GemCode技術,通過控制微流體的進入,將帶barcode、UMI(Unique Molecular Index,分子標簽)、引物及酶的凝膠珠(Gel Beads)與單細胞混合,從而實現(xiàn)大規(guī)模的單細胞分離,以及單細胞文庫構建的技術。

設備的工作原理:首先將樣本制備成單細胞懸液。將制備好的細胞懸浮液利用微流控芯片,將帶有細胞標簽序列的凝膠珠(bead)和細胞包裹在液滴中。在液滴中,細胞破裂,釋放的mRNA與凝膠珠上的細胞標簽序列相連,形成單細胞GEMs結構(Gel Bead in Emulsions)。細胞的mRNA在液滴中進行逆轉(zhuǎn)錄反應形成cDNA,隨后破乳,進行 cDNA 的文庫構建。通過文庫序列上的細胞標簽序列可以區(qū)分目標序列來自于哪一個細胞。細胞和反應試劑在微流控芯片上的一條通道中,凝膠珠在另一條通道,共同形成GEM。在每個GEM中獨立進行反轉(zhuǎn)錄,之后帶有標簽的 cDNA 將被混合然后擴增再進行文庫構建。

使用10X Genomic平臺完成對單個細胞的分離與標記后,接下來就是采用NGS技術對標記后的細胞進行測序分析。
奧美泰克作為實驗室國產(chǎn)自動化解決方案提供商,深耕NGS建庫自動化領域,針對不同試劑廠家的建庫試劑盒定制開發(fā)了一系列成熟的自動化解決方案,大大減少了由于建庫流程中繁雜的實驗操作導致的人力與時間上的投入,降低了由于人為誤差導致的出錯風險。

AMTK LH-1808全自動液體處理工作站整合了溫控模塊、加熱震蕩模塊、磁分離模塊,全自動PCR模塊,可輕松實現(xiàn)文庫構建的全流程自動化。
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